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詳細介紹
| 品牌 | BIOHUB | 供貨周期 | 現貨 |
|---|---|---|---|
| 主要用途 | 作為抗體反應等的印跡封閉溶液使用 | 應用領域 | 生物產業(yè),制藥/生物制藥 |
western blot中脫脂奶粉的作用
封閉
原理：用非抗原的蛋白去封閉膜的蛋白質結合位點，避免標記抗體固定在膜上引起背景增高，常用的封閉液有BSA,脫脂奶粉,明膠, tween-20等,一般脫脂奶粉。
實驗步驟：
5%脫脂奶粉（用1x TBS配制，或1xTBST配制）封閉一晚上 或室溫1~2小時
當一抗為抗磷酸化抗體時，脫脂奶粉由于含有較多磷酸化蛋白，請改為使用BSA。
2，一抗、二抗孵育
原理： 一抗可以與要檢測的蛋白特異結合，二抗可與一抗結合，同時二抗上帶有特異的酶（如辣根過氧化物酶HRP，堿性磷酸酶法AP等 ),標記酶可以分解化學顯色底物產生有顏色的條帶或催化化學發(fā)光底物使膠片感光。
實驗步驟：
一抗孵育：5%脫脂奶粉稀釋一抗到合適的濃度，與膜室溫孵育1小時或4度一晚上（抗體濃度及孵育時間需根據不同的抗體做相應調整， 1xTBST，洗膜3次，每次5分鐘。
二抗孵育：5%脫脂奶粉稀釋二抗到合適的濃度，與膜室溫孵育1小時， 1x TBST,洗膜3次，每次5分鐘。
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